1 植物材料

　　螺旋藻、水稻、烟草

2 试剂和溶液

（ 1 ） 20 × SSC ： 3mol/L NaCl 、 0.3 mol/L 柠檬酸钠， PH8.0 ；

（ 2 ）溶菌酶、 10μg/μl RNase 、 10 ％ SDS （均为 Sigma 产品）；

（ 3 ）酚：氯仿：异戊醇＝ 25 ： 24 ： 1 ；

（ 4 ） TE ： 10mmol/L Tris-HCl ； 1mmol/L EDTA ， PH7.6

3 提取步骤

　　收集对数生长期的螺旋藻细胞，悬浮于 5 倍体积（ V/W ）含 2mg/ml 溶菌酶的 20 × SSC 中，室温保持 10min ，偶尔摇动混匀。水稻幼苗和烟草嫩叶在液氮中研磨成粉末后，立即用 5 倍体积的 20 × SSC 悬浮，并轻轻拌匀。上述悬浮液在冰上先放置 3min ，然后加入 10 ％ SDS 至终浓度为 2 ％，混匀；继续放置 10min 后，在 4 ℃用 11000 × g 离心 15min 。上清液转移至新的离心管中，并用相同体积的 TE 稀释，再加入 RNase 至终浓度为 10μg/ml ，室温放置 30min ，然后用酚：氯仿：异戊醇抽提一次。水相转移至新的离心管中，加入 0.6 倍体积的异丙醇，室温置数分钟。 11000 × g 离心 15min ，所得的 DNA 沉淀用 70 ％的乙醇洗两次后，真空抽干或自然干燥，最后溶于适量的 TE 中。

　　注：20 × SSC 悬浮液中加入 10 ％ SDS 至终浓度为 2 ％时，溶液会出现白色絮状沉淀，表明蛋白质已经变性。这是本方法的特点之一。通过变性后离心而不是常用的多次酚抽的方法除去绝大多数蛋白质。离心所得的上清液需要用 TE 稀释，这是因为溶液中盐浓度较高。如不稀释， RNase 无法起作用；而且再沉淀 DNA 时，如用乙醇会将溶液中的盐析出，如用异戊醇则形成两相的界面。将溶液中盐的浓度降低后，就解决乐这些问题。但加大稀释 TE 的体积，对于 DNA 的产量并无非常明显的作用，故用等体积的 TE 稀释即可。 DNA 抽提液经 RNase 酶解后，再用酚：氯仿：异戊醇抽提一次，用于除去剩余的蛋白质和酶。